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RNeasy Mini Kit baixa proporção 260/230 - posso purificar este RNA para uso posterior?

RNeasy Mini Kit baixa proporção 260/230 - posso purificar este RNA para uso posterior?



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Usei o RNeasy Mini Kit da Qiagen para isolar o RNA de 5 * 10 ^ 5 C28 / I2 (condrócitos humanos imortalizados). No entanto, meu rendimento é baixo (~ 25 ng / ul), mas minha proporção de 260/280 é ótima (~ 2,3) e minha proporção de 260/230 é trágica (~ 0,06). Já joguei fora a coluna de spin, mas gostaria de saber 1) se eu poderia aumentar minha proporção de 260/230 para os 40 ul de RNA que extraí, e 2) se eu poderia precipitar o RNA da solução para faça uma solução mais concentrada.

Por favor, me avise se mais detalhes forem necessários.

Obrigado!


O kit RNAeasy geralmente não causa contaminação fenólica. Seu pobre 260/230 talvez se deva ao baixo rendimento; verifique os valores absolutos de absorbância. Baixo 260/230 (e baixo rendimento) também ocorre devido à lise inadequada. Aconselho que você faça a lise celular usando métodos mais eficazes. Eu não recomendaria outra etapa de precipitação de fenol-clorofórmio ou álcool - você perderá seu RNA. Com o que você tem agora, passe um pouquinho no gel para ver a integridade. Também tente aquecer o RNA dissolvido a 65-70deg por 10-15min e meça a DO novamente (use nanodrop ou um dispositivo semelhante)


Assista o vídeo: How To Interpret Nanodrop Results For RNA (Agosto 2022).